追求高速和的分離功能
為提高實驗室的效率,我們需要告訴的HPLC,而且也需要高速HPLC分析得到的分析數(shù)據必須像傳統(tǒng)HPLC系統(tǒng)中得出的數(shù)據一樣可靠。例如,在高速LC中進行的1000個分析中,其分離度必須保持一個很高的水平;對于小體積樣品進樣,保留時間和峰面積重復性需保持到一個較好的水平;而且能夠限度地減低零部件的替換并保持儀器良好的穩(wěn)定性。
我們目前已可不依賴高壓運行的進行良好的高速分離,同時有能提供之前的快速LC系統(tǒng)未能提供的高精度及可擴展性。
特點一:
超快的速度及高分離效能
Prominence UFLC系統(tǒng)和新型的反向色譜柱的結合與傳統(tǒng)的HPLC系統(tǒng)相比,速率是其十倍。而且高速的樣品進樣機制可顯著降低總的分析循環(huán)時間。Prominence UFLC的分離度是傳統(tǒng)HPLC的三倍,因此在傳統(tǒng)HPLC中不易分離的樣品在新型的系統(tǒng)中充分分離。
毋庸置疑的高精確度—重復性及速率
高速LC中的高精確度的和自動進樣器可改善小體積樣品的重復率,在長期穩(wěn)定性實驗中可取得并保持高重復性。Prominence UFLC擁有超高基本性能。
高速及高分離柱Shim-pack XR-ODS
基于分離、耐久因素以及應用壓力的考量,開發(fā)出Shim-pack XR-ODS柱。
LC工作站 Labsolutions
島津Labsolution軟件提供高通量、儀器控制、多元數(shù)據處理以及法規(guī)應對等功能,可提供一個直觀的、可操作性強的運行環(huán)境。
超快速及高分離性能
液相色譜分離速率通過應用超細粒徑的分析柱以及增加流動相的流速進而得到增加。當實際檢測時間減少時,分離循環(huán)時間所需的其他因素變的極為重要:例如:自動進樣器進樣所需時間,梯度延遲時間以及系統(tǒng)調節(jié)時間。
Prominence UFLC可提供對于這些因素的解決方式,可大大降低總分析時間,由此最終可提高實驗室的效率。
高速LC分析—10倍于傳統(tǒng)LC
以下是對一個新的反相柱—配置了Shim-pack XR-ODS的Prominence UFLC以及配置傳統(tǒng)柱(150mmL. x 4.6mm i.d., 5um)的傳統(tǒng)LC的比較。在傳統(tǒng)LC中,分離度為1.2的苯并熒異構體(峰7與8)的洗脫時間為35分鐘,而在配置了Shim-pack XR-ODS的Prominence UFLC中的洗脫時間則為3.5分鐘,同時還可保持同樣的優(yōu)質分辨率。苯并苝(峰9)的保留時間從傳統(tǒng)中的50.4分鐘減少到另一個中的5.07分鐘,同時其理論板數(shù)有輕微變化,從10,600 到 11,900。
Prominence UFLC的分析時間減少至傳統(tǒng)LC的1/10,同時還保持了分離效率。
(根據分離環(huán)境不同,分析時間的減少也會有所不同。)
總分析循環(huán)時間減少
在利用高速柱進行分析,分析時間減少時,其他影響分析周期的因素變得十分重要,比如自動進樣器進樣所需時間,梯度延遲時間以及系統(tǒng)調整時間。如果自動進樣樣器進樣時間比較緩慢,則它將占據了總分析循環(huán)時間的大部分時長。Prominence UFLC內配置了一個快速的自動進樣器(10秒鐘10uL進樣),提供了極快的分析周期。
就總分析時間的例子進行的連續(xù)三個周期的快速分析對比
(假定分析時間:30秒;其他快速LC自動進樣器進樣活動時間:30秒)
一系列自動特征:諸如自動排液,通過手動操作縮短啟動時間。在梯度操作時減少色譜柱入口濃度變化的延遲時間;系統(tǒng)調控時間的初始化,UFLC內更小的系統(tǒng)體積的應用。
超快速梯度分析
以上的Prominence UFLC展示了優(yōu)良的梯度分析。下圖所示數(shù)據為一個分析周期的30秒左右的高速梯度分析。
Prominence UFLC在未應用高壓的情況下,通過優(yōu)化系統(tǒng)及柱體效率提供超高速和高分離。
柱體特征:Shim-pack XR-ODS (30mmL. x 3mm i.d.) 溫度:80°C, 流動相:水/乙腈梯度洗脫液
流速:3.0mL/min
檢測波長:245nm
樣品:
高分離分析—比一般分離高出三倍
盡管Shim-pack XR-ODS擁有較小的粒徑填料,但壓降(備壓)較小,而且可以使用長柱子。因此,在未使分析時間變長的基礎上,可取得高分離的具有高理論板數(shù)色譜圖,這在以前是從未實現(xiàn)過的。下圖的色譜圖對比了以應用配置了Shim-pack XR-ODS的Prominence UFLC和傳統(tǒng)LC分別進行的苯并熒蒽異構體的分離。Prominence UFLC可提供較短的分析時間以及超高的分離率(Rs),同時3倍的理論板數(shù)。
特點二:
高準確度,穩(wěn)定性及耐久性
*重復性是HPLC的重要性能,此性能并不以犧牲高速率為代價。Prominence UFLC配置了一個成熟的程溶劑輸送組件(流速分辨率為3.7nL/分., 10uL/沖程),擁有改良的硬件由此可帶來超快的梯度。Prominence自動進樣器,擁有高度密封的測量設備和高精密閥,對于快速LC可實現(xiàn)高重復性。
小體積進樣和超快速分析的重復性
對普通超快速LC來說,通常小體積進樣的重復性不太好。下圖和表為Prominence UFLC就2uL進樣量的色譜圖,一分鐘的梯度分析重復性RSD小于0.2%。
柱體特征:Shim-pack XR-ODS (30mmL. x 3mm i.d.) 溫度:80°C, 流動相:水/乙腈梯度洗脫液
流速:1.5mL/分
檢測波長:245nm
樣品:
峰 | 保留時間 | 峰面積 | |||
平均 | %RSD | 平均 | %RSD | ||
1. | 苯乙酮 | 0.377 | 0.076 | 49018 | 0.193 |
2. | 丙酮 | 0.493 | 0.072 | 47260 | 0.167 |
3. | 苯丁酮 | 0.587 | 0.070 | 49199 | 0.055 |
4. | 苯戊酮 | 0.677 | 0.065 | 45277 | 0.138 |
5. | 苯己酮 | 0.763 | 0.082 | 46613 | 0.186 |
6. | 苯庚酮 | 0.842 | 0.087 | 43975 | 0.205 |
7. | 辛基酰苯 | 0.914 | 0.080 | 48978 | 0.200 |
(2uL injection, n=6)
對于儀器控制的精確度,是基于分析驗證過程和質量控制測試要求下進行的。同時為了減少系統(tǒng)故障對分析的影響,重要的控制因素是自動進樣器上的高壓閥。Prominence UFLC應用島津自身研發(fā)的高精度的6通閥,在100,000例耐久測試中可達到小于0.1%或極小的面積重復性(RSD)。
除此之外,LC-MS檢測中,樣品殘留量受到極大的關注。Prominence UFLC通過抑制樣品吸附,成功的實現(xiàn)極小殘留。
島津6通閥耐久性實驗數(shù)據
在完成100,000次循環(huán)耐久測試后的樣品重復性。
峰 | 保留時間 | 峰面積 | |||
平均值 | %RSD | 平均值 | %RSD | ||
1. | 苯乙酮 | 0.916 | 0.089 | 312670 | 0.059 |
2. | 丙酮 | 1.398 | 0.058 | 315739 | 0.045 |
3. | 苯丁酮 | 2.111 | 0.030 | 336428 | 0.063 |
4. | 苯戊酮 | 3.341 | 0.031 | 296609 | 0.040 |
(5uL injection, n=6)
Shim-pack XR-ODS
Shim-pack XR-ODS使用2.2um粒徑填料,極為巧秒地平衡著分離效率和壓力。
Shim-pack XR-ODS柱可以使得高速和高分離分析在低于30MPa下實現(xiàn),它是島津在常規(guī)柱壓條件下實現(xiàn)高速和高分離的解決方案。
每一個Shim-pack XR-ODS柱擁有三個質量證書。島津嚴格控制著每一個色譜柱的質量,依據證書標準生產確保色譜柱的一致性。
Shim-pack XR-ODS規(guī)格
(mm)內徑 | (mm)長度 |
2.0 | 30 / 50 / 75 /100 |
3.0 | 30 / 50 / 75 /100 |
4.6 | 30 / 50 / 75 /100 |
對于常規(guī)的分析,建議使用3.0mm i.d. 50mm長的色譜柱。2.0mm的色譜柱常用于半微量高速分析。
PTC氨基酸的應用
柱前衍生方式用于氨基酸的分析--通過使用PITC(苯基異硫氰酸)試劑使氨基酸衍生成PTC(苯氨基硫代甲酰基),并通過UV檢測器檢測。下圖為PTC衍生17種種氨基酸中的在4分鐘內分離分析圖。
柱:Shim-pack XR-ODS (75mmL. x 3mm i.d.)
溫度:40℃
流動相:磷酸鹽緩沖液/乙腈溶液,梯度洗脫
流速:1.2 mL/min
檢測波長:254nm
黃豆中大豆異黃酮的分析
大豆異黃酮為黃豆中富含的物質,尤其是大豆胚芽中。由于其類似雌激素的作用,大豆異黃酮引起了廣泛的關注。通過梯度洗脫可分析黃豆中的大豆異黃酮。
柱:Shim-pack XR-ODS (75mmL. x 3mm i.d.)
溫度:40℃
流動相:甲酸水溶液/甲酸乙腈溶液,梯度洗脫
流速:1.2 mL/min
檢測波長:275nm