注意事項(xiàng):
盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細(xì)菌或真菌污染,會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
染色后宜盡快檢測(cè),時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀察時(shí),盡量縮短觀察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞,并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè),這樣通??梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
產(chǎn)品名稱:腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱:HBMEC細(xì)胞
貨號(hào):LZ-X969964
規(guī)格:T25
生長(zhǎng)特性:貼壁
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價(jià),產(chǎn)品貨期短,價(jià)格優(yōu),售后齊全。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè);
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
Gill蘇木素染色液(Gill )Chlorogenic acid;綠原酸谷氨酰酶(glutaminase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
Gill蘇木素染色液(Gill No.2)Chlorogenic acid;綠原酸谷氨酰半胱氨酸合成酶(glutamyl systeine synthetase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
Gill蘇木素染色液(Gill No.2)Chlorpromazine (hydrochloride);氯鹽酸鹽 谷胱甘肽(GLUTATHIONE)總濃度比色法定量檢測(cè)試劑盒
Gill蘇木素染色液(Gill No.3)Chlorpromazine (hydrochloride);氯鹽酸鹽 谷胱甘肽(GLUTATHIONE)總濃度熒光定量檢測(cè)試劑盒
Gill蘇木素染色液(Gill No.3)Chlorpromazine (hydrochloride);氯鹽酸鹽 谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSH ST)總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
Heidenhain鐵蘇木素染色液Chlortetracycline (hydrochloride);鹽酸金霉素谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSH ST)總活性酶動(dòng)力比色法定量檢測(cè)試劑盒
天青石藍(lán)蘇木素染色液Chlortetracycline (hydrochloride);鹽酸金霉素谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH PX)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
改良MacConaill鉛蘇木素染色液Chlortetracycline (hydrochloride);鹽酸金霉素谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH PX)活性酶動(dòng)力比色法定量檢測(cè)試劑盒
蘇木素?zé)o水乙溶液(5%)Cholecalciferol;維生素D3谷胱甘肽合成酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
蘇木素?zé)o水乙溶液(10%)Cholecalciferol;維生素D3谷胱甘肽還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
伊紅染色液(進(jìn)口水溶)Cholecalciferol;維生素D3骨架(肌動(dòng)蛋白單體;G-ACTIN)紅色熒光染色試劑盒
伊紅染色液(進(jìn)口水溶)Cholesterol;膽固骨架(肌動(dòng)蛋白微絲;F-ACTIN)綠色熒光染色試劑盒
伊紅染色液(水溶)Cholesterol;膽固3C類蛋白酶(SARS -CoV 3C-like PROTEASE)活性熒光淬滅法定量檢測(cè)試劑盒
伊紅染色液(水溶)Choline (chloride);氯化膽堿胱氨酸(cystine)含量比色法定量檢測(cè)試劑盒
伊紅染色液(水溶,5%)Choline (chloride);氯化膽堿胱氨酸(cystine)含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒
HBMEC細(xì)胞解整合素金屬蛋白酶10(ADAM10)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human SFMBT2 ELISA Kit魚精蛋白P1抗體
脫氧核糖核酸酶I(DNase-I)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human SFPQ ELISA Kit肝生長(zhǎng)因子抗體
Ⅲ型膠原(COL3)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human SFRS14 ELISA Kit組蛋白去乙?;?抗體
雷帕霉素靶蛋白(mTOR)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human SETMAR ELISA Kit人乙肝病Large S蛋白抗體
促睡眠肽α(δSIP-α)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human SERPIND1(Serpin family D member 1) ELISA KitHER4抗體
甘露聚糖結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶1(MASP1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SF3A1 ELISA Kit原基因1/bri3結(jié)合蛋白抗體
CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白δ(C/EBPδ)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human BIRC2(Baculoviral IAP repeat-containing protein 2) ELISA Kit肝病核心抗原C區(qū)抗體